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麥哲儀器對蛋白質(zhì)提取的兩個方法研究
點擊次數(shù)：522 發(fā)布時間：2012-10-17
一、植物組織蛋白質(zhì)提取方法
1、根據(jù)樣品重量（1g 樣品加入 3.5ml 提取液，可根據(jù)材料不同適當加入），準備提取液放在冰上。
2、把樣品放在研缽中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上靜置（3-4 小時）。
3、用離心機離心 8000rpm40min4℃或 11100rpm20min4℃
4、提取上清夜，樣品制備完成。蛋白質(zhì)提取液：300ml
1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml
2、甘油（Glycerol）75ml
3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g
這種方法針對 SDS-PAGE，垂直板電泳！
二、植物組織蛋白質(zhì)提取方法三氯醋酸—丙酮沉淀法
1、在液氮中研磨葉片
2、加入樣品體積 3 倍的提取液在-20℃的條件下過夜，然后離心（4℃8000rpm以上 1 小時）棄上清。
3、加入等體積的冰浴丙酮（含 0.07%的β-巰基乙醇），搖勻后離心（4℃8000rpm以上 1 小時），然后真空干燥沉淀，備用。
4、上樣前加入裂解液，室溫放置 30 分鐘，使蛋白充分溶于裂解液中，然后離 心（15℃8000rpm 以上 1 小時或更長時間以沒有沉淀為標準），可臨時保存在 4℃待用。
5、用 Brandford 法定量蛋白，然后可分裝放入-80℃?zhèn)溆谩?br /> 藥品：提取液：含 10%TCA 和 0.07%的β-巰基乙醇的丙酮
裂解液：2.7g 尿素 0.2gCHAPS 溶于 3ml 滅菌的去離子水中（終體積為 5ml），使用前再加入1M 的 DTT65ul/ml。這種方法針對雙向電泳，雜質(zhì)少，離子濃度小的特點！當然單向電泳也同樣適用，只是電泳的條帶會減少！
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