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技術(shù)文章
農(nóng)藥殘留速測(cè)儀測(cè)定原理以及方法介紹
點(diǎn)擊次數(shù)：1180 發(fā)布時(shí)間：2013-6-4
1、農(nóng)藥殘留速測(cè)儀檢測(cè)原理
農(nóng)殘速測(cè)儀檢測(cè)原理是采用酶抑制法，在一定條件下。有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥能抑制*酯酶的活性，其抑制率與農(nóng)藥的濃度星正相關(guān)11-21。在正常情況下，酶催化代謝產(chǎn)物水解．其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計(jì)在410am處測(cè)定吸光度隨時(shí)間的變化值，計(jì)算出抑制率，通過(guò)抑制率的大小可以判斷樣品中是否有高劑量的有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的存在。
2、農(nóng)殘速測(cè)方法
2．1試劑配制與保存
2．1．1緩沖液。用量筒量取500mL蒸餾水，先用少量（100一150mL）的蒸餾水緩緩倒入放有緩沖劑干粉的量杯中，用玻棒攪拌至*溶解后將量筒中剩余的蒸餾水倒人量杯中充分?jǐn)嚢瑁〒u勻），待用。
2．1．2顯色劑。用刻度吸管吸5．2mL緩沖液注入顯色劑瓶中，蓋上蓋搖勻，置于0—5℃環(huán)境中備用，切勿冷凍。
2．1．3底物。用刻度吸管吸5．2mL蒸餾水注入底物干粉瓶中，蓋上蓋搖勻，置于嘰5cc環(huán)境中備用。
2．2樣液制備
取干凈的蔬菜，用天平準(zhǔn)確稱(chēng)取2g，葉菜取葉片部分，果菜橫截削下一片，葉片、瓜肉等剪成Icm2，置于100mL小燒杯內(nèi)；用吸管吸10mL緩沖液注入小燒杯中，振蕩提取2min左右；提取結(jié)束后靜置2—3min，取上層清液作為樣液。
2．3儀器操作與樣品測(cè)定
2．3．1儀器預(yù)熱。接通電源，儀器自檢，自檢結(jié)束后待機(jī)預(yù)熱10min．儀器工作穩(wěn)定后進(jìn)行測(cè)量13-71。
2．3．2對(duì)照測(cè)定。向檢測(cè)板zui左排比色孔中用的移液槍分別加10卜L酶試劑，再用250斗L移液槍吸取250斗L緩沖液于比色孔，按上下鍵選擇“啟動(dòng)振板”菜單后按“確認(rèn)”鍵啟動(dòng)振板10S，振板結(jié)束后。讓酶試劑和緩沖液混合液靜置反應(yīng)10min，用的移液槍向比色孔分別加入lO斗L顯色劑和10斗L底物，立即將檢測(cè)板放入托盤(pán)，按“對(duì)照”鍵測(cè)量（反應(yīng)時(shí)間設(shè)為lmin）。測(cè)試結(jié)束，按“確認(rèn)”鍵顯示對(duì)照吸光度變化值。待空白對(duì)照值的吸光度變化值在0．15加．30，才可測(cè)定樣品。否則要重新做空白測(cè)定。測(cè)量結(jié)束后儀器自動(dòng)保存當(dāng)前的對(duì)照值，下一次測(cè)量樣品時(shí)就可以
2．3．3樣品測(cè)定。若已完成各通道的對(duì)照測(cè)試，將檢測(cè)板上所有比色孔作為樣品測(cè)量。用不同移液槍分別給比色孔加酶液10“L／孔，加注樣品液250斗【／孔，顯色劑lO斗L／孔。操作步驟同對(duì)照測(cè)試，zui后按“樣品”鍵測(cè)量，測(cè)試結(jié)束后，顯示當(dāng)前測(cè)量的樣品抑制率結(jié)果和吸光度變化值。可根據(jù)需要打印被測(cè)樣品抑制率。
2．3．4測(cè)試結(jié)果的判定。測(cè)定結(jié)果以抑制率表示。根據(jù)GB／T5009．199—2003判定要求，當(dāng)樣品對(duì)酶的抑制率≥50％時(shí)，表示蔬菜中有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥存在，樣品為陽(yáng)性結(jié)果。陽(yáng)性結(jié)果的樣品需重復(fù)測(cè)2次以上。
農(nóng)殘速測(cè)儀檢測(cè)原理是采用酶抑制法，在一定條件下。有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥能抑制*酯酶的活性，其抑制率與農(nóng)藥的濃度星正相關(guān)11-21。在正常情況下，酶催化代謝產(chǎn)物水解．其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計(jì)在410am處測(cè)定吸光度隨時(shí)間的變化值，計(jì)算出抑制率，通過(guò)抑制率的大小可以判斷樣品中是否有高劑量的有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的存在。
2、農(nóng)殘速測(cè)方法
2．1試劑配制與保存
2．1．1緩沖液。用量筒量取500mL蒸餾水，先用少量（100一150mL）的蒸餾水緩緩倒入放有緩沖劑干粉的量杯中，用玻棒攪拌至*溶解后將量筒中剩余的蒸餾水倒人量杯中充分?jǐn)嚢瑁〒u勻），待用。
2．1．2顯色劑。用刻度吸管吸5．2mL緩沖液注入顯色劑瓶中，蓋上蓋搖勻，置于0—5℃環(huán)境中備用，切勿冷凍。
2．1．3底物。用刻度吸管吸5．2mL蒸餾水注入底物干粉瓶中，蓋上蓋搖勻，置于嘰5cc環(huán)境中備用。
2．2樣液制備
取干凈的蔬菜，用天平準(zhǔn)確稱(chēng)取2g，葉菜取葉片部分，果菜橫截削下一片，葉片、瓜肉等剪成Icm2，置于100mL小燒杯內(nèi)；用吸管吸10mL緩沖液注入小燒杯中，振蕩提取2min左右；提取結(jié)束后靜置2—3min，取上層清液作為樣液。
2．3儀器操作與樣品測(cè)定
2．3．1儀器預(yù)熱。接通電源，儀器自檢，自檢結(jié)束后待機(jī)預(yù)熱10min．儀器工作穩(wěn)定后進(jìn)行測(cè)量13-71。
2．3．2對(duì)照測(cè)定。向檢測(cè)板zui左排比色孔中用的移液槍分別加10卜L酶試劑，再用250斗L移液槍吸取250斗L緩沖液于比色孔，按上下鍵選擇“啟動(dòng)振板”菜單后按“確認(rèn)”鍵啟動(dòng)振板10S，振板結(jié)束后。讓酶試劑和緩沖液混合液靜置反應(yīng)10min，用的移液槍向比色孔分別加入lO斗L顯色劑和10斗L底物，立即將檢測(cè)板放入托盤(pán)，按“對(duì)照”鍵測(cè)量（反應(yīng)時(shí)間設(shè)為lmin）。測(cè)試結(jié)束，按“確認(rèn)”鍵顯示對(duì)照吸光度變化值。待空白對(duì)照值的吸光度變化值在0．15加．30，才可測(cè)定樣品。否則要重新做空白測(cè)定。測(cè)量結(jié)束后儀器自動(dòng)保存當(dāng)前的對(duì)照值，下一次測(cè)量樣品時(shí)就可以
2．3．3樣品測(cè)定。若已完成各通道的對(duì)照測(cè)試，將檢測(cè)板上所有比色孔作為樣品測(cè)量。用不同移液槍分別給比色孔加酶液10“L／孔，加注樣品液250斗【／孔，顯色劑lO斗L／孔。操作步驟同對(duì)照測(cè)試，zui后按“樣品”鍵測(cè)量，測(cè)試結(jié)束后，顯示當(dāng)前測(cè)量的樣品抑制率結(jié)果和吸光度變化值。可根據(jù)需要打印被測(cè)樣品抑制率。
2．3．4測(cè)試結(jié)果的判定。測(cè)定結(jié)果以抑制率表示。根據(jù)GB／T5009．199—2003判定要求，當(dāng)樣品對(duì)酶的抑制率≥50％時(shí)，表示蔬菜中有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥存在，樣品為陽(yáng)性結(jié)果。陽(yáng)性結(jié)果的樣品需重復(fù)測(cè)2次以上。